Super Green qPCR mix?(~Sybr Green ?qPCR mix）(None/Low/High ROX & Universal)
產(chǎn)品儲(chǔ)存：?-20 ℃?避光保存12個(gè)月，使用前充分溶解混勻。Mix?融解后可在?4℃避光條件下穩(wěn)定存放一個(gè)月，盡量避免反復(fù)凍融。
2)???????本制品含Super Green I?強(qiáng)光下易分解，降低靈敏度，使用時(shí)避免長(zhǎng)時(shí)間強(qiáng)光照射本制品。
3)???????建議在冰上配制PCR反應(yīng)液，再放入PCR儀器中擴(kuò)增?？梢蕴岣邤U(kuò)增特異性，減少背景。
4)???????使用前上下顛倒輕輕混勻?Mix，請(qǐng)勿渦旋振蕩混勻，避免產(chǎn)生過(guò)多氣泡。
5)???????推薦的引物終濃度為?0.2μM，可在?0.1~1μM?范圍內(nèi)優(yōu)化。
①?引物濃度調(diào)整：當(dāng)引物終濃度在0.1~1.0μM范圍之間變化時(shí)，引物濃度越低,?擴(kuò)增特異性越高，但擴(kuò)增效率會(huì)有所下降。
②?擴(kuò)增程序優(yōu)化：需提高擴(kuò)增特異性，可使用兩步法程序或提高退火溫度；需提高擴(kuò)增效率，可使用三步法程序或延長(zhǎng)延伸時(shí)間。
a)???????擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度建議控制在?80~200 bp；引物長(zhǎng)度為?18~25 bp；
b)???????正向引物和反向引物的?Tm?值相差不超過(guò)?1℃為佳，Tm值控制在58~62℃為佳；
c)???????引物的?GC?含量控制在?40%~60%?之間；引物?3'?端最后一個(gè)堿基最好為?G?或者?C；
d)???????引物?A、G、C、T?整體分布盡量要均勻，避開(kāi)?T/C?或者?A/G?的連續(xù)結(jié)構(gòu)（特別是?3'?端）；
e)???????避開(kāi)引物內(nèi)部或者兩條引物之間的互補(bǔ)序列；
f)???????使用NCBI BLAST功能檢索確認(rèn)引物的特異性。
4.?建議PCR反應(yīng)體系（以50μL反應(yīng)體系為例，反應(yīng)液配制請(qǐng)?jiān)诒线M(jìn)行）
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5. qPCR?反應(yīng)程序（可根據(jù)機(jī)型適當(dāng)調(diào)整）
b.?不同qPCR?儀的熔解曲線采集程序有差別，一般可使用儀器默認(rèn)的熔解曲線采集程序。
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Eppendorf Mastercycler? ep realplex?系列； |
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